將污染的組織培養(yǎng)物放在41℃培養(yǎng)18小時(shí),可殺死支原體,但對(duì)細(xì)胞有不良影響。所以在處理前要進(jìn)行預(yù)試驗(yàn),摸索能大限度殺死支原體又對(duì)細(xì)胞影響小的加熱時(shí)間。此法有時(shí)不可靠。若先用藥物處理后,再以41℃加溫處理效果更佳。
用5%的兔支原體免疫血清(血凝效價(jià)1:320以上)可去除支原體污染,因特異抗體可抑制支原體生長(zhǎng),故經(jīng)抗血清處理后11天即轉(zhuǎn)為陰性,并且5個(gè)月后仍為陰性。但此法比較麻煩,不如用抗生素方便、經(jīng)濟(jì)。
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除了上述去除污染的方法外,還有動(dòng)物體內(nèi)接種除菌法、巨噬細(xì)胞吞噬法、污染培養(yǎng)瓶中加溴尿嘧啶再用光照射的方法及過濾法等,但均較麻煩,且效果不確定。所以一旦支原體污染,除非有特別重要價(jià)值,一般均棄之重新培養(yǎng)。
二、污染的預(yù)防
預(yù)防是防止細(xì)胞培養(yǎng)過程中發(fā)生污染的辦法。只有預(yù)防工作做在前,才能將發(fā)生污染的可能性降到小程度。一般預(yù)防可從以下幾方面著手:
?。ㄒ唬奈锲?、用品消毒滅菌著手
細(xì)胞培養(yǎng)所用物品清洗、消毒要*,各種溶液滅菌除菌要仔細(xì),并在無菌試驗(yàn)陰性后才能使用。操作室及剩余的無菌器材要定期清潔消毒滅菌。
(二)從操作者做起
1、細(xì)胞培養(yǎng)操作者責(zé)任心要強(qiáng),要細(xì)心穩(wěn)重,操作技術(shù)要熟練。進(jìn)無菌室前要用肥皂洗手或用5%新潔爾滅浸泡5分鐘,按規(guī)定穿隔離衣。進(jìn)入后關(guān)好門,坐下來盡量少走動(dòng)。工作開始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。事先要嚴(yán)格檢查器材、溶液和培養(yǎng)物,不要把污染品或未經(jīng)消毒的物品帶入無菌室內(nèi),更不能隨便使用,以免造成大批污染。
2、操作者動(dòng)作要輕,必須在火焰周圍無菌區(qū)內(nèi)打開瓶口,并將瓶口轉(zhuǎn)動(dòng)燒灼。操作時(shí)盡量不要談話,若打噴嚏或咳嗽應(yīng)轉(zhuǎn)向背面。
3、操作時(shí)要常更換吸管,切勿一根吸管做到底。一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去。實(shí)驗(yàn)完畢及時(shí)收拾,保持實(shí)驗(yàn)室清潔整齊,后用消毒水浸泡的紗布擦臺(tái)面。
?。ㄈ┓乐辜?xì)胞交叉污染
在進(jìn)行多種細(xì)胞培養(yǎng)操作時(shí),所用器具要嚴(yán)格區(qū)分,做上標(biāo)記便于辨別。并按順序進(jìn)行操作,避免一起進(jìn)行時(shí)易發(fā)生混亂。
在進(jìn)行換液或傳代操作時(shí),注射器和滴管不要觸及細(xì)胞培養(yǎng)瓶瓶口,以免把細(xì)胞帶到培養(yǎng)液中污染其他細(xì)胞。
細(xì)胞培養(yǎng)所有細(xì)胞一旦購(gòu)置,或從別處引入,或自己建立,均應(yīng)及早留種凍存,一旦發(fā)生污染可棄之復(fù)蘇,重新培養(yǎng)。